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抗體真的是偶聯(lián)上磁性熒光編碼微球的嗎?

  • 發(fā)布日期:2024-04-18      瀏覽次數(shù):338
    • 在熒光編碼微球的偶聯(lián)方法中,可以用氨基和羧基的共價偶聯(lián)方式,也可以用親和素和生物素的偶聯(lián)方式,但還有一種讓抗體連到微球上的方式經(jīng)常被忽略了,那就是無處不在的物理吸附。

      流式熒光編碼微球通常為含有氧化鐵納米粒子的聚苯乙烯微球,表面為各種功能團修飾。長期以來有一個容易忽略的問題,那就是聚苯乙烯表面是疏水的,這種疏水的表面在生理水溶液條件下,能通過疏水相互作用與抗體/抗原等發(fā)生物理結(jié)合。所以我們在將蛋白偶聯(lián)到微球的時候,即使我們采用是某種特定的偶聯(lián)方式,但實際上這個物理吸附作用是不可避免的。而事實上,這種物理吸附的方式也是常用的在表面固定生物大分子的一種方式,如著名的JSR公司提供的表面疏水的磁性微球就可以直接通過物理吸附結(jié)合抗體。

      回到流式熒光法的磁性熒光編碼微球連接蛋白,這種吸附作用會帶來什么影響?我們仔細(xì)分析一下,物理吸附是一種不太牢固的固定方式,由總體上較弱的分子間作用力(范德華力)而產(chǎn)生的。它是一個動態(tài)的平衡過程,有一部分吸上去,也會有一部分釋放出來。這對于單因子檢測(流式熒光法應(yīng)該沒太多人會用來測單因子),影響應(yīng)該不大,不管吸附上的還是釋放出來都是它。但是對于聯(lián)合檢測,這種不固定的動態(tài)平衡則會導(dǎo)致本該特異性結(jié)合的抗原/抗體釋放出來,然后被其它不對應(yīng)的磁性熒光編碼微球吸附上去,最終會對檢測的特異性和準(zhǔn)確性造成很大的干擾。

      綜上所述,在選擇微球時,信號值高是一個很重要的參數(shù),但需要思考的是這種高熒光值到底是通過物理吸附還是來自于偶聯(lián)的信號,而這些物理吸附會不會影響聯(lián)合檢測中的特異性和準(zhǔn)確性。

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